分析化学

2019, v.47(09) 1419-1428

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对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究
Selection of Nanobody and Recognition Mechanism between Nanobody and Parathion

张玉琪;张瑾如;王锋;李家冬;司睿;吕丽珊;沈玉栋;王弘;HAMMOCK Bruce D;孙远明;

摘要(Abstract):

对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段(15 kDa),来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×10~(7 )cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法(Phage ELISA)鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。

关键词(KeyWords): 纳米抗体;对硫磷;噬菌体展示;分子模拟

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 十三五重点研发计划项目(Nos.2016YFE0106000,2018YFC1602904);; 广州市科技计划项目(No.201804020077);; 广东省重点领域研发计划项目(No.2019B020211002);; 广东省高等学校珠江学者岗位计划项目(2017)资助~~

作者(Author): 张玉琪;张瑾如;王锋;李家冬;司睿;吕丽珊;沈玉栋;王弘;HAMMOCK Bruce D;孙远明;

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