- 申聪聪;吴呈珂;陈粤华;王建秀;阳明辉;仉华;
外周血中循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell, CTC)是癌症转移的重要媒介,可提供完整的细胞生物学信息,被认为是目前最具有应用前景的液体活检靶标之一。然而,全血中CTC具有含量极低、基质环境复杂、自身异质性强等特点,因此,开发高效的富集分离及检测方法是实现CTC精准分析的关键。目前已报道的CTC分析方法主要是基于CTC的物理或生化特性,将传统的密度梯度离心、超微膜过滤、免疫磁分离结合新型的微流控、双向电泳-场分离等技术,再联合免疫细胞化学、光声成像、表面增强拉曼散射、电化学法等方法,实现CTC的精准分析。本文对近年来CTC的富集分离技术、检测方法、临床检测面临的挑战等进行了探讨和总结,以期为进一步完善CTC的富集分离、精准计数及分子表型等方面的基础研究及临床应用提供参考。
2021年04期 v.49 483-495页 [查看摘要][在线阅读][下载 6892K] [引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：699 ] |[网刊下载次数：0 ] - 杨成;张亚旗;林黛琴;刘洋;孙冰冰;
构建了以赭曲霉毒素A(OTA)核酸适配体为"裂开型"核酶激活"开关"的化学发光传感器,用于葡萄酒中OTA的高灵敏度检测。K~+诱导富含G碱基的寡聚核苷酸折叠成平行G-四链体结构,平行G-四链体与血红素复合生成具有类过氧化物酶活性的核酶,可催化过氧化氢氧化鲁米诺产生化学发光。将OTA核酸适配体序列插入可形成核酶的"裂开型"核酸链中,使核酸适配体成为激活核酶催化活性的"开关"。当体系中不存在OTA时,OTA的核酸适配体呈自由链状,"裂开型"核酶的两段核酸序列距离较远,无法有效形成具有酶活性的复合物,催化活性较低;当OTA存在时,OTA诱导核酸适配体形成反平行G-四链体结构,适配体的两端序列相互杂交,从而拉近"裂开型"核酶的两段核酸序列,使其可形成平行G-四链体结构,并与血红素复合,生成具有明显的类过氧化物酶活性的核酶。以鲁米诺为底物,采用化学发光法实现了OTA的高灵敏检测。本方法的线性范围为0.10～2.00 nmol/L,检出限为0.10 nmol/L。
2021年04期 v.49 496-503页 [查看摘要][在线阅读][下载 2535K] [引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：371 ] |[网刊下载次数：0 ] - 国振;周霞;赵博;赵光亮;李先江;李秀琴;张庆合;
建立了同时检测面粉及面粉处理剂中4种非法添加剂(曲酸、苯甲羟肟酸、噻二唑和噻苯咪唑)的高效液相色谱-二极管阵列检测器(High performance liquid chromatography-diode array detector, HPLC-DAD)定量分析方法。样品经甲醇提取后,采用C_(18)色谱柱分离、甲醇-0.01%H_3PO_4溶液梯度洗脱、二极管阵列检测器检测,以外标法进行定量分析。对色谱条件和前处理方法进行了优化,考察了流动相组成对分离度的影响,以及提取溶剂种类、提取方式等对提取效率的改善。结果表明,4种非法添加剂在0.1～2.0μg/mL范围内线性关系良好(R~2≥0.9998),方法检出限(S/N≥3)介于0.3～0.7 mg/kg之间,3个浓度水平的加标回收率为80.8%～95.9%,相对标准偏差为0.5%～4.9%(n=6)。本方法操作简便、净化效果好、准确度高,适用于面粉及面粉处理剂中非法添加剂的筛查和检测。
2021年04期 v.49 504-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 1903K] [引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：591 ] |[网刊下载次数：0 ] - 朱莉莉;陈大勇;童文骏;
采用基于轨道阱(Orbitrap)超高分辨质谱的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术,对商品化亚麻籽提取物中环肽类物质的翻译后修饰(PTM)与亚麻籽品种、加工条件及其关联性进行了研究,用于以亚麻籽环肽的氧化程度及氧化位点为指标的亚麻籽油品质评价,探究加工过程中影响亚麻籽油品质的关键条件。优化了分析条件,建立了环肽的鉴定及定量方法。通过精确分子量测定及串联质谱(Tandem MS)分析,在生、熟亚麻籽提取物中分别鉴定到16种及21种氧化型环肽物种;以氧化型环肽与还原型环肽质谱积分峰面积比值定量表征氧化程度。结果表明,加工工艺中的高温干燥步骤对亚麻籽环肽的氧化有显著影响,氧气的存在利于甲硫氨酸残基的氧化,棕色亚麻籽氧化水平对温度及氧气条件的响应更敏感。
2021年04期 v.49 512-519页 [查看摘要][在线阅读][下载 4308K] [引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：350 ] |[网刊下载次数：0 ] - 金津;宋善军;彭子娟;郭峰;李彭辉;
建立了在线固相萃取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法同时测定血清中6种多溴二苯醚和5种羟基代谢产物。200μL血清样品经蛋白沉淀、稀释后,直接分析。采用自动进样,样品中的目标物在固相萃取柱上富集,甲醇-乙腈-水混合溶剂反向洗脱至液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪完成分离分析。对上样速率、洗脱时间和洗脱溶剂等参数进行了优化,最终选择Oasis HLB型在线固相萃取柱,上样溶剂为纯水,上样速率为3.0 mL/min,洗脱溶剂为甲醇-乙腈-水(54∶26∶20,V/V),洗脱流速为1.0 mL/min,液相色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C_(18)。方法定量限为0.14～0.74 ng/L,基质加标回收率在61.8%～77.7%之间,检测结果的相对标准偏差在3.7%～10.1%(n=3)之间。将本方法应用于30个实际血清样品的分析检测,共检出4种多溴二苯醚和2种羟基多溴二苯醚,其赋存特征与已有报道一致。本方法可应用于大批量实际样品的分析检测,具有较强的实用价值。
2021年04期 v.49 520-527页 [查看摘要][在线阅读][下载 2526K] [引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：328 ] |[网刊下载次数：0 ] - 涂祥婷;杨鸿波;郭峰;曾士宜;滕春丽;孙晓红;何锦林;林绍霞;
建立了快速滤过型净化(Multi-plug filtration cleanup, m-PFC)-超高效液相色谱-四极杆-静电场离子轨道阱高分辨质谱法同时测定鱼肉中16种全氟烷基化合物(Perfluorinated alkylated substances, PFASs)。样品经1%甲酸-乙腈溶液超声提取,通过式m-PFC固相萃取柱净化,氮吹浓缩至1 mL后,以AcquityWaters BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)分离,甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液进行梯度洗脱。质谱采用Full MS/dd-MS~2扫描模式,正离子和负离子切换扫描,采用内标法进行定量分析。在最佳的分析条件下,16种目标物在13 min内均可实现良好分离,各物质的精确质量数偏差均小于2.83×10~(-6),在0.10～20.0μg/L浓度范围内,各化合物线性关系良好,相关系数(R~2)均大于0.990,方法的检出限为0.015～0.05μg/kg。在0.50、 2.0和5.0μg/kg的基质加标水平下,平均回收率为70.7%～110.1%,相对标准偏差(Relative standard deviations, RSDs)为0.5%～12.8%。将本方法应用于25个野生鱼样品的快速分析,共检出10种PFASs,其中全氟辛酸(Perfluorooctane sulfonate, PFOS)为主要污染物。本方法操作简单、快速、准确度高、灵敏度高,适用于鱼肉中16种PFASs的快速检测。
2021年04期 v.49 528-537页 [查看摘要][在线阅读][下载 1937K] [引用频次：25 ] |[阅读次数：1 ] |[下载次数：684 ] |[网刊下载次数：0 ] - 王静如;巢静波;陆达伟;李秀城;
以纳米颗粒跟踪分析仪为检测手段,建立了二氧化钛(TiO_2)纳米颗粒分散和检测的方法,考察了分散剂种类、超声方式、超声时间、超声温度、分散试剂浓度、pH值对TiO_2分散的影响,以及本分散方法对于一般商品TiO_2的通用性。采用NTA测定粒径和颗粒数量浓度,对检测过程中稀释试剂浓度、稀释倍数等检测条件进行了优化,颗粒数量浓度、粒径检测结果分别采用单颗粒电感耦合等离子体质谱和纳米粒度电位仪进行验证,偏差分别为±10%和±5%。以确定的分散及检测方法对样品进行长期稳定性考察,稳定时间可达1个月,可用于基础研究及相关检测方法开发。
2021年04期 v.49 538-545页 [查看摘要][在线阅读][下载 3082K] [引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：644 ] |[网刊下载次数：0 ] - 刘栓;冯梦雨;李晓敏;唐光诗;张庆合;李秀琴;
建立了玉米粉中黄曲霉毒素(AFB1、 AFB2、 AFG1、 AFG2)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和伏马毒素B1的液相色谱-同位素稀释质谱(LC-IDMS-MS)测定方法。采用阳性样品对提取溶剂进行优化,结果表明,样品经过乙腈-水-甲酸(80∶19.9∶0.1,V/V)浸泡12 h后进行首次提取,再采用乙腈-水-甲酸(20∶79.9∶0.1,V/V)进行二次提取,提取效率更高,同时也证明对阳性样品进行提取条件的优化更科学和准确。研究了样品提取前浸泡时间、取样量等对提取效率以及方法精密度的影响,结果表明,样品浸泡12 h,可更有效地提取目标物;由于真菌毒素在基体中不易分布均匀,因此取样量直接影响方法的精密度,本方法的最小取样量为10 g。研究了8种真菌毒素在玉米粉中的基质效应,结果表明,真菌毒素在玉米粉中均有很强的基质抑制现象,基质效应在22%～77%之间;而且个别毒素与其相应的同位素标记物的基质效应有较大差异,如采用溶剂校准液进行定值,基质效应会直接影响测量结果的准确性。因此,在没有空白基质情况下,可采用校正因子θ值对定量结果进行校正,以消除基质效应的影响。本方法具有简单、快速、准确度高和灵敏度高等优点,可用于真菌毒素类基体标准物质的赋值。
2021年04期 v.49 546-557页 [查看摘要][在线阅读][下载 997K] [引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] - 段磐辉;孟珂;张宜文;高慧;马康;
纯度标准物质是量值溯源的源头,纯度值与有机杂质的定性和定量分析结果直接相关。莱克多巴胺(Ractopamine, RAC)是一种合成的β-肾上腺受体激动剂,是典型瘦肉精类物质之一。本研究采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF/MS)对莱克多巴胺标准物质候选物中的有机杂质进行定性分析,鉴定出4种主要有机杂质A(m/z 286.1802)、B(m/z 316.1907)、C(m/z 438.2275)和D(m/z 372.2533),4种杂质的碎片离子峰质量数的质量偏差范围为-0.6～0.6 mDa,相对质量偏差为-3.7×10~(-6)～2.1×10~(-6)。利用高分辨质谱数据,建立了莱克多巴胺和有机杂质的质谱碎片离子的裂解途径,推断出杂质A为莱克多巴胺脱水、加氢的副产物,B、 C、 D是与莱克多巴胺拥有相同分子骨架结构的类似物。使用HPLC-IT-TOF/MS对有机杂质质谱碎片进行对比验证,结果表明,两种不同类型高分辨质谱测定的莱克多巴胺及其杂质的质谱碎片推断的结构式一致性良好。本研究为有机杂质的定性分析的结果验证提供了新思路。
2021年04期 v.49 554-562页 [查看摘要][在线阅读][下载 3535K] [引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] - 田甜;刘书妤;李双青;李秀琴;张庆合;
采用四极杆轨道阱高分辨质谱,建立了快速检测氘标记化合物同位素分布与丰度的新方法。首先,建立仪器质量数偏差(IME)和同位素偏差(ID)的计算方法;其次,确定方法的适用前提为仪器质量偏差小于同位素偏差(即IME<ID)。采用流动注射分析物工作溶液(100μg/kg),采集总离子流图(TIC),在TIC图上每隔0.1 min选取1张质谱图,得到10张质谱图,以盐酸曲托喹酚-D_9(TMQ-D_9)模型物进行分析,考察测量允许偏差(Δ)和提取质谱图数量对同位素分布和丰度测量结果的影响。结果表明,在测量允许偏差(Δ)小于同位素偏差条件下,提取质谱图数量≥10张时,测量结果准确可靠。采用本方法测定TMQ-D_9和9种氘标记β-受体激动剂同位素分布与丰度,并将检测结果与"质量簇"分类和标准品标识同位素丰度值进行比较,结果表明,本方法灵敏度更高、同位素分布测量更准确。本方法快速简单,适于推广应用。
2021年04期 v.49 563-572页 [查看摘要][在线阅读][下载 2192K] [引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：347 ] |[网刊下载次数：0 ] - 张玮庭;宋善军;卢柏灵;彭子娟;李彭辉;
建立并优化了对沉积物中多氯联苯(PCBs)、多溴联苯醚(PBDEs)和有机磷酸酯阻燃剂(OPFRs)3种有机污染物同时测定的分析方法。采用加速溶剂萃取(ASE)法对沉积物样品进行萃取,并通过固相萃取与层析柱串联方法对样品进行净化。在优化的分析条件下,PCBs的平均加标回收率为104.1%～121.7%, PBDEs的平均加标回收率为80.7%～101.6%, OPFRs的平均加标回收率为80.7%～132.2%,本方法可有效降低基质效应的影响。应用标准物质SRM-1944进行方法确证,证明本方法准确性良好。对采集于黄河三角洲地区的20个表层沉积物样品进行分析,分别检出了PBDEs和OPFRs等12种化合物,浓度范围为0.01～0.38 ng/g和1.18～21.99 ng/g,该区域有机磷系阻燃剂含量明显高于溴代阻燃剂。实际样品分析结果表明,本方法可满足实际样品分析检测的需求。
2021年04期 v.49 571-580页 [查看摘要][在线阅读][下载 1187K] [引用频次：19 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：885 ] |[网刊下载次数：0 ]
- 熊孟;任金芝;胡善文;徐静娟;陈洪渊;
设计了一种集成微流控芯片,基于适配体亲和毛细管电泳技术分析了痕量蛋白质。此集成芯片包含两个功能性单元,即用于样品富集的纳米孔薄膜单元和用于样品分离的凝胶筛分介质单元,前者可以提高检测灵敏度,后者可实现复合物有效分离。利用空间可控光图案化技术,在玻璃芯片的特定区域制备聚N-异丙基丙烯酰胺纳米孔薄膜微结构,并在分离通道与薄膜相邻处无缝灌注甲基纤维素凝胶,完成零死体积功能性单元集成。以凝血酶适配体亲和体系为模型,评估集成芯片的性能,以一种不含富集单元的简单双"T"微流控芯片为对照,采用共聚焦激光诱导荧光系统对其进行检测,经过30 s富集和120 s分离,集成芯片检测范围为1～40 nmol/L,检出限为1 nmol/L(S/N=3),比对照芯片的检出限(100 nmol/L)低100倍,显示出明显的信号增强能力和较好的分离度。此集成芯片有望用于其它亲和电泳体系,以提高生化分析检测灵敏度。
2021年04期 v.49 602-610页 [查看摘要][在线阅读][下载 6241K] [引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] - 陈文勇;王建华;杨甜甜;霍庚阳;徐薇;李宾;周星飞;
淀粉样多肽在"拥挤"环境中的自组装与神经退行性疾病密切相关。本研究在恒温高湿度密闭环境中,获得了云母表面厚度可控的纳米水层,并详细研究了Aβ16-22在纳米水层中的扩散和聚集行为。结果表明,淀粉样多肽可以在纳米水层中扩散,并形成不同高度的纳米片层,而且样品的培养温度和多肽浓度对纳米片层的结构和形态具有决定性的影响。原子力显微镜峰值力定量模式(PeakForce-QNM)测试表明,纳米水层中形成的Aβ16-22纳米片层的弹性模量约为(5.0±0.4) GPa,明显大于溶液中形成的淀粉样纤维的弹性模量((3.1±0.2) GPa)。纳米红外光谱成像显微镜(NanoIR)分析结果表明,云母表面水层中形成的纳米片层的二级结构主要是α-helix,不同于纤维中的β-sheet结构,这可能是引起两者压缩弹性模量差异的原因。
2021年04期 v.49 611-617页 [查看摘要][在线阅读][下载 4749K] [引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：98 ] |[网刊下载次数：0 ] - 王恩鹏;杜连云;朱爽;韩燕燕;刘淑莹;陈长宝;李平亚;
建立了以超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UHPLC-QQQ-MS)同时检测大鼠血浆中20(S)-人参皂苷Rg3 (20(S)-ginsenoside Rg3, G-Rg3)及其主要代谢产物20(S)-人参皂苷Rh2 (20(S)-ginsenoside Rh2, G-Rh2)含量的快速分析方法,用于分析中波紫外线(UVB)辐射致抑郁模型大鼠口服G-Rg3后的药代动力学行为。选择Ascentis~? Express C_(18)色谱柱(5 mm×3 mm, 2.7μm),以0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为5μL,电喷雾离子源(ESI)在负离子模式下,对G-Rg3和G-Rh2进行定性与定量分析。定量分析选择多反应监测(MRM)模式进行扫描,以人参皂苷Rb1(20(S)-ginsenoside Rb1, G-Rb1)为内标(Internal standard, IS),离子对分别为m/z 783.5/621.4、621.4/459.4和1107.6/954.5。本方法的精密度、日内及日间准确率均满足药代动力学分析要求,10 min内即可完成全部分析。G-Rg3与G-Rh2分别在2.0～2500 ng/mL和2.0～2500 ng/mL范围内线性关系良好(R~2>0.9907), G-Rg3经灌胃给药后在两组大鼠体内代谢过程皆符合二室模型特征,正常组和模型组t_(1/2α)分别为(0.35±0.116) h和(1.954±0.609) h,t_(1/2β)分别为(66.103±6.425) h和(52.496±33.639) h, AUC_((0-t))分别为(346.75±14.11)μg/(L·h)和(551.374±117.557)μg/(L·h), AUC_((0-∞))分别为(497.66±39.672) g/(L·h)和(694.523±213.077) g/(L·h)。两组之间的药代动力学参数具有显著差异(p<0.01),推断UVB辐射导致的抑郁作用可改变大鼠的机体内环境,影响G-Rg3的吸收与代谢。本方法简便、快速、选择性好、灵敏度高,适用于UVB辐射致抑郁模型大鼠的G-Rg3及其代谢产物G-Rh2的药代动力学研究。
2021年04期 v.49 618-627页 [查看摘要][在线阅读][下载 1449K] [引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：996 ] |[网刊下载次数：0 ] - 张鑫;李彦松;汤波;张浩;焦朋飞;韦宇平;王鹏;
利用表面分子印迹技术,以Fe_3O_4磁性纳米微球为基质材料、熊果酸为模板分子、 3-氨丙基三乙氧基硅烷为功能单体、正硅酸乙酯为交联剂,制备了熊果酸磁性分子印迹纳米微球,用于熊果酸的高选择性快速分离。采用透射电子显微镜和振动样品磁强计对制备的复合纳米材料进行表征,通过吸附动力学和吸附等温线考察了制备的磁性分子印迹纳米微球的吸附性能。结果表明,磁性分子印迹纳米微球对熊果酸的最大吸附量为58.17 mg/g,印迹因子为3.65。此外,磁性分子印迹纳米微球具有良好的稳定性和重复利用率,回收率为96.5%～97.8%, RSD为2.2%～3.1%(n=5)。本研究制备的熊果酸磁性分子印迹微球具有操作简单、吸附速度快、吸附容量大、选择性高、环境友好的优点,适用于熊果酸的快速选择性分离提取。
2021年04期 v.49 628-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 2981K] [引用频次：18 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：879 ] |[网刊下载次数：0 ] - 陈晶晶;郭帅;朱亚先;张勇;
建立了双波长-导数-同步荧光法,实现了模拟条件下溶解态1-甲基菲(1-Methlyphenanthrene, 1-MP)及其代谢产物1-羟基-2-萘甲酸(1-Hydroxy-2-naphthoic acid, 1H2NA)和水杨酸(Salicylic acid, SA)的同时测定。所建方法测定1-MP、1H2NA及SA的线性范围分别为0.02～1.30μmol/L、0.02～7.60μmol/L和0.01～5.20μmol/L,检出限(LOD)分别为0.11、0.33和2.90 nmol/L,相对标准偏差均小于2%,样品加标回收率在97.4%～108.6%之间。本方法具有原位、在线动态实时研究1-MP降解过程及机制的应用潜力。
2021年04期 v.49 636-641页 [查看摘要][在线阅读][下载 1433K] [引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] - 陈阳;赵杰;张嘉惠;李静;杜佩瑶;卢小泉;
罗丹明B(RhB)染料用于荧光检测时通常不具有选择性,限制了其在分析传感中的应用。本研究合成了一种将RhB包封在锆基金属有机框架(PCN-777)孔道中的复合材料(RhB@PCN-777),用于水体中Fe~(3+)的特异性检测。与单独的RhB相比,RhB@PCN-777的光稳定性有所提高,并且在检测过程中减少了其它离子的干扰。RhB@PCN-777复合材料在水相中发射黄色荧光。在pH=6.0的条件下,RhB@PCN-777可以高灵敏度、高选择性检测Fe~(3+),检出限为0.16μmol/L。实际水样中Fe~(3+)的加标回收率为94.2%～103.9%,表明本方法在实际样品检测中具有良好的实用性。
2021年04期 v.49 642-651页 [查看摘要][在线阅读][下载 5157K] [引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] |[下载次数：734 ] |[网刊下载次数：0 ] 下载本期数据